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非挥发性有机酸检测
非挥发性有机酸检测
有机酸类是分子结构中含有羧基的化合物，在植物的各组织部位，尤其是果实中均广泛存在。有机酸参与了氨基酸、脂肪、糖类的代谢中间过程，也可以可以影响植物体内酶的活性、影响植物的抗逆性和适应力，同时参与了植物的能量代谢，更是果实的重要风味成分。
维百瑞生物开发了一种HPLC的方法，可以同时检测植物中10种主要有机酸成分。
实验案例
从左至右依次为草酸，酒石酸，苹果酸，乳酸，乙酸，乳清酸，马来酸，富马酸，琥珀酸
安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于化学、生物学、中医学与中药学、食品科学技术领域的分析仪器
技术指标
1、流速最大 5 mL/min时压力最高 60 MPa (600 bar, 8700 psi)；
2、流速最大5 mL/min时压力最高40 MPa；
3、0.05 – 5.0 mL/min（可设定流速增量为 0.001 mL/min）；
4、≤ 0.07 % RSD 或 0.02 min SD，取较大值者；
5、整个波长范围内，一般6.5 nm。
安捷伦1260高效液相色谱
质控说明
▶ 进样前会先跑标准品，每个点进两针，保证重复性没有问题后才会跑样品。
▶ 上样时每十个样进一个质控样（标样），一般进中间浓度的质控样，与原来的峰面积进行比较，如果峰面积偏差不超过10%则判断稳定性合格。
▶ 客户有要求的话可对其样品做添加回收，但一般样品都是盲样，无法很好的控制添加回收的标样量（一般要求添加标样的量和样品中的目标物含量一致）。建议用内标法做会更准确。
▶ 对于内源植物激素很难做基质空白对照，如做植物生长调节剂等外源激素，客户可提供空白基质，实验时可扣除基质干扰，使结果更准确。
取样方法
1、样品类型
▶ 细胞，取样后离心，去除培养基，立即放入液氮中，之后-80°保存。
▶ 叶片、茎、花等，取下后立即放入液氮中，之后-80°保存。
▶ 果实的果肉、果皮等，如果野外现场不具备分离条件，需尽快(30MIN内)转移至室内，分离样品放入液氢中，之后-80°保存。
2、混合取样
▶ 每份样品混合来自至少3株以上的组织。以水稻叶片为例：取同一时期，表型基本一致的，同一个部位的1片叶片，同时取6株，放到的10M离心管中，并迅速放入液氮中。
3、样品重量和重复
▶ 新鲜的、干净的植物样品(鲜样)，样本建议量>1G，最少量>0.6G。准备3份及以上生物学重复。
4、储存和运输
▶ 采摘样品后立即用液氨速冻统一使用5ML或15ML质量较好的离心管(根据样本类型、大小选择离心管规格)装入样品，需足量的干冰运输至公司。所有盛装样品的管子需在常温下用记号笔清晰标注样品名称(勿在冷冻温度下标注)。另外，由于植物对损伤的应激反应会影响植物激素含量，为得到准确并符合预期的结果，尽量减少植物样品在常温下的暴露时间。
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